Itachi est le frère aîné de Sasuke. Très tôt il se révèle être exceptionnellement doué dans tous les domaines : à 7 ans il sort premier de sa promotion de l'académie ninja. A 8 ans, il est déjà capable d’activer le sharingan. A 10 ans, il devient Chunin.
Il intégra l'ANBU de Konoha, une unité d'élite chargée des missions périlleuses et reconnaissables aux masques d'animaux que ses membres portent. Les relations entre Itachi et son père ont toujours été très tendues : Itachi acceptait de moins en moins le fait que son appartenance aux Uchiwa l’empêchait de développer ses véritables capacités. Son père exigeait beaucoup de lui, comme être un intermédiaire entre le clan et les autorités de Konoha.
Pour obtenir le mangekyou sharingan, il tua son meilleur ami, Shinsui Uchiwa. Cette condition est en effet nécessaire pour l'obtenir. Il a massacré tout son clan par pur caprice, à l'exception de Sasuke afin que celui-ci apprenne à maîtriser le mangekyou sharingan. Il voulait en effet que Sasuke progresse jusqu’à atteindre son niveau pour pouvoir affronter la seule personne capable de lui tenir tète : un autre Uchiwa détenteur du sharingan.
Après ce massacre il quitta Konoha et s'engagea dans l'Akatsuki, afin de pouvoir accroître sa puissance. Il devint très vite l'un des membres les plus puissants.Orochimaru tenta de le terrasser juste avant son départ de l'Akatsuki mais ses techniques ne pouvaient pas rivaliser face au sharingan d'Itachi. Après cela, Orochimaru quitta l’Akatsuki, par complexe d'infériorité. Il est le seul avec Pein et Konan à savoir qui est véritablement Tobi. Il fait équipe avec Kisame.